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雙抗夾心法ELISA實驗操作步驟

更新時間:2019-07-18 點擊量:2202

上海恒遠生物科技有限公司由資深專家?guī)ь^組建研發(fā)團隊,十幾年ELISA試劑盒開發(fā)經(jīng)驗,品質(zhì)保障,值得信賴;BIM品牌試劑盒更是度高,已被國內(nèi)重點實驗室廣泛使用,如北京生命科學(xué)研究所,中國科學(xué)院,協(xié)和醫(yī)科大學(xué)等;諸多刊物的文章廣泛引用,如Nature, PNAS, Cell Research, Biomaterials等,目前SCI文章及國內(nèi)核心期刊引用已達數(shù)百篇。專業(yè)技術(shù)團隊提供完備的售前及售后服務(wù),確保您實驗成功!我司來教您做實驗有哪些步驟?

    操作步驟:
    1.|標(biāo)準品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準品孔10孔,在第yi、第二孔中分別加標(biāo)準品100μl,然后在第yi、第二孔中加標(biāo)準品稀釋液50μl,混勻;然后從第yi孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為24μg/L ,16μg/L, 8μg/L,4μg/L, 2μg/L)。

    2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。


    3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。


    4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。


    5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。


    6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。


    7.溫育:操作同3。


    8.洗滌:操作同5。

 

    9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.


    10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。


    11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

    上海恒遠生物科技有限公司ELISA試劑盒均都經(jīng)過嚴格交叉反應(yīng)和干擾測試及穩(wěn)定性試驗,作為一種分析檢測試劑,具有反應(yīng)模式,可滿足廣泛的檢測需求,新老客戶一致認為質(zhì)量好,價格低,是同類產(chǎn)品中的性價比,讓您無后顧之憂。我司秉承“信譽第yi、*yi、品牌第yi、誠信為本"的理念,以優(yōu)良的服務(wù)質(zhì)量和實惠的價格,ELISA試劑盒實驗前,請仔細閱讀中英文說明書,我們提供免費代測,實驗過程指導(dǎo)服務(wù),詳情咨詢上海恒遠生物在線客服。

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