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試劑盒用于酶標儀的檢測程序

更新時間:2012-12-06 點擊量:2132

酶標比色儀簡稱酶標儀,通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計。針對固相載體形式的不同,各有特制的適用于板、珠和小試管的設計。許多試劑公司配套供應酶標儀。酶標儀的主要性能指標有:測讀速度、讀數(shù)的準確性、重復性、度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可到0.001,準確性為±1%,重復性達0.5%。舉例說,若某孔測得的A值為1.083,則該孔相對于空氣的真實A值應為1.083±0.01(1.073~1.093),重復測定數(shù)次,其A值均應1.083±0.05(1.078~1.088)在之間。酶標儀的可測范圍視各酶標儀的性能而不同。普通的酶標儀在0.000~2.000,新型號的酶標儀上限拓寬達2.900,甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示。應注意可測范圍與線性范圍的不同,線性范圍常小于可測范圍,比如某一酶標儀的可測范圍為0.000~2.900,而其線性范圍僅0.000~2.000,這在定量ELISA中制作標準曲線時應予注意。 酶標儀不應安置在陽光或強光照射下,操作時室溫宜在15~30℃,使用前先預熱儀器15-30分鐘,測讀結(jié)果更穩(wěn)定。測讀A值時,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD用492nm波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀,即每孔先后測讀兩次,*次在zui適波長(W1),第二次在不敏感波長(W2),兩次測定間不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1,630nm為W2,zui終測得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。各種酶標儀性能有所不同,使用中應詳細新聞記者說明書。


酶聯(lián)免疫試劑盒檢測程序
1. 建立標準曲線:設標準孔8孔,每孔中各加入樣品稀釋液100ul,*孔加標準品100ul,混勻后用加樣器吸出100ul,移至第二孔。如此反復作對倍稀釋至第六孔,zui后,從第六孔中吸出100ul棄去。第七孔為空白對照,第八孔為零孔。
2. 加樣:待測品孔每孔各加入待測樣品100ul混勻。
3. 將反應板充分混勻后粘上封板紙置37 oC 120分鐘。
4. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。
5. 每孔(除零孔)加*抗體工作液50ul,置37℃ 60分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔(除零孔)加酶標抗體工作液100ul(兩滴),將反應板置37 oC 60分鐘。
8. 洗板:同前。
9. 每孔加入底物液A、B各一滴,置37 oC避光反應15分鐘。
10. 每孔加入1滴終止液混勻。
11. 在450nm處測吸光值。

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