不少朋友在為春節(jié)前的zui后一次實驗認真準備著，而在實驗的過程中大大小小的問題總會遇到一些。今天上午，一位來自上海科研所的客戶孫老師來電與我公司技術專員交流ELISA實驗問題。在交流的過程中，孫老師表示：

    “做定量要驗證試劑盒的線性范圍，目前我的盒子線性范圍太窄，線性區(qū)間的高點與低點的濃度值比值為16。我嘗試了改變反應模式，將線性范圍略擴寬了一些——線性區(qū)間的高點與低點的濃度值比值為32。如果高點往上一個梯度延伸，則R平方就只有0.96（已經(jīng)是的結果了）。總的來說線性范圍還是太窄。我參考了其他一些廠家的ELISA定量試劑盒，基本上線性區(qū)間的高點與低點的濃度值比值都≥64。我知道，ELISA的信號值范圍窄，但我想線性區(qū)間的高點與低點的濃度值比值≥64應該還是可以的。那么如何才能將試劑盒的線性范圍擴寬？"

    對此，上海恒遠技術專員分析解說到：試劑盒的線性范圍影響的主要因素應該是抗體本身的性質，其次才是ELISA反應的各種條件。如果在優(yōu)化了各種反應條件下線性范圍還是很窄，只能說制的抗體不是很好。而線性范圍的影響有兩個因素，*個可能因素是本身抗體的親和力，親和力越高靈敏度越高，高點與低點比值也就越高，若標準曲線的斜率接近于1，抗體親和力還是可以的。比值沒有相關規(guī)定說一定要高于64。

    第二個可能因素是本身抗原的影響。不同的蛋白ELISA其靈敏度都不相同，線性范圍也不同，如果你的項目在某一濃度達到平臺值，說明這個蛋白與其抗體結合與解離在此濃度下達到了平衡，改變其他條件也無法增加，除非改用化學發(fā)光法。若是同一種蛋白其線性范圍沒有其他盒子做的高，可嘗試改變條件降低其背景值從而降低低濃度來提高比值。

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